我公司新品1，25雙羥基維生素D試劑盒操作簡單方便，不需氮吹儀，現貨供應，下面是介紹：

1、 1，25雙羥基維生素D試劑盒預期用途
運用酶聯免疫法體外定量檢測血清中的1,25-二羥基維生素D的濃度。

2、 1，25雙羥基維生素D試劑盒基本信息

3、 1，25雙羥基維生素D試劑盒臨床背景
A． 1，25雙羥基維生素D試劑盒生物活性
維生素D主要由皮膚中的7-脫氫膽固醇合成，部分來源于飲食和補充劑。在肝臟中，維生素D的25位碳原子羥基化生成25-羥基維生素D。25-羥基維生素D進一步在腎臟和其它組織代謝，羥基化生成有活性的維生素D，1,25-二羥基維生素D，作用于腸、腎臟、骨骼和其它組織器官。孕婦胎盤和結節病的巨噬細胞也產生1,25-二羥基維生素D。

1,25-二羥基維生素D是維生素D的活性形式，而25-羥基維生素D和維生素D本身是無活性的。1,25-二羥基維生素D促進腸道對鈣、磷的吸收，促進骨的吸收和礦化，從而防止佝僂病和軟骨病。1，25-二羥基維生素D存在于負責其轉運的組織（胎盤、腎臟、乳腺…）和內分泌腺，如甲狀旁腺。1,25-二羥基維生素D代謝快，在血中的半衰期大約12h，主要代謝產物是維生素D3-23羧酸，一個C-23的羧酸衍生物，沒有生物活性。另一條途徑，1,25-二羥基維生素D經過24位-羥基化生成活性較低的1,24,25-三羥基維生素D，是一次要途徑。

1,25-二羥基維生素D在血清或血漿中的濃度比25-羥基維生素D低100到1000倍。由于濃度低及存在很多類似物，測定1,25-二羥基維生素D需要層析柱提取和分離。

B．1，25雙羥基維生素D試劑盒臨床應用
1,25-二羥基維生素D水平失常，影響鈣的代謝，如：磷代謝、類肉狀瘤病，腎衰竭、甲旁亢和甲旁低、腫瘤引起的高鈣血癥、高鈣尿、維生素耐受功能障礙，抗驚厥藥物治療。

4、1，25雙羥基維生素D試劑盒檢測原理
樣本和質控品需要經過混合溶劑的提取和層析柱的分離，使1,25-二羥基維生素D和其它維生素D代謝物分開，校準品不需要經過層析柱分離。之后，將校準品、純化的樣本和質控品直接加入包被1,25-二羥基維生素D的微孔板中孵育。

操作步驟 Ⅰ. 提取步驟：！只用于質控品和樣本 1. 試管(12 x 75 mm)編號：2個質控品和zui多40個樣本。 2. 每個試管中加入0.5 mL質控品或樣本。 3. 每個試管中加入2 mL提取溶劑。 4. 蓋上試管蓋，1200 rpm振蕩1h。 5. 室溫下離心5min（800g）。 6. 上清液用于下一步分離。

Ⅱ. 分離步驟：！只用于質控品和樣本。 1. 玻璃管(16 x 100 mm)或(12 x 120 mm)，或塑料管(falcon 2097)編號，用于層析：2個質控品和zui多40個樣本。 2.每個管中放一個二氧化硅層析柱。 3.從層析柱上端加入1.6mL提取上清液（2 x 0.8mL），在重力作用下慢慢滴下。 4.1mL洗滌液洗層析柱參見試劑制備 ！注意：每個層析柱上不能出現真空，因為需要重力作用。 5.從層析柱上端加入500μL二氯甲烷，在重力作用下慢慢滴下。 6.從層析柱上端加入500μL蒸餾水，室溫離心5min（800g）。 7.試管(12 x 75 mm)編號，用于洗脫1,25-二羥基維生素D。離心后，將層析柱中的物質轉移到相應的玻璃試管中。8.從每個層析柱上端加入300μL 洗脫液用來洗脫1,25-二羥基維生素D，然后室溫下離心5min（800g）。 9.混勻洗脫餾分。 注意：此步之后，樣本必須立即加入微孔板中孵育，防止樣本降解。 Ⅲ. 孵育 1.選擇所需數量的微孔進行試驗。未使用的微孔應放回有干燥劑的包裝袋中封好，儲存在于2-8℃。 2.將微孔安裝到固定架上。 3.用旋渦混合器混勻校準品、提取的質控品和樣本。 4.加入150uL孵育緩沖液到所有的微孔中。 5.加入50uL的校準品（未提取），洗脫的質控品和樣本到對應的微孔中。 6.用封板膜封閉或蓋上微孔板，2-8℃下孵育18±2h。 一夜孵育后，洗板前60min+/-15min準備辣根過氧化物酶結合物工作液. 7.從每個微孔中吸出液體。 洗板3次： — 加入洗滌液0.35mL到每個微孔中 — 吸出各微孔中的溶液 8.加入200uL的辣根過氧化物酶結合物工作液到微孔板的每個微孔中。 9.用封板膜封閉或蓋上微孔板，4℃下孵育 1h。
10.從每個微孔中吸出液體。 洗板3次： — 加入洗滌液0.35mL到每個微孔中 — 吸出各微孔中的溶液 11.洗板后15分鐘內，吸取200uL顯色溶液加入到每個微孔中。 12.室溫下，孵育15分鐘，避免陽光直射。 13.在各微孔中加入100uL終止液。 14.在1小時內，讀取450 nm下的吸光度值（參考波長630nm或650nm）。