技術文章 / article
骨切片的選擇？
2022-06-27 瀏覽次數：1520
北京科瑞美公司的骨切片由牛股骨的皮質部分制成，*適合96孔板，直徑6mm，大概200μm厚。采用傳統染色法和培養基ELISA（CrossLaps）骨破壞重吸收的體外精確檢測。
骨是一種很有活力的組織，在人的一生中都在不斷地重建。現已證實，在骨中存在一些特殊物質，能夠影響到破骨細胞的活性。因此在北歐生物科技公司，我們使用高質骨而不是牙質應用于研究。現在將向我們的客戶提供此類服務。
每批骨切片通過重吸收檢測法來測試其質量。在該檢測中，由骨切片上產生凹點證明破骨能力。隨后用培養基酶免吸附試劑盒Crosslaps檢測上清液。只有當兩項測試都呈陽性時，該骨切片才能用于進一步的重吸收檢測。
破骨細胞產生凹點的活性通過人破骨重吸收方法檢測。對破骨重吸收的定量分析可以采用傳統的對凹點染色方法，亦可使用培養基酶免吸附檢測法Crosslaps，
由于破骨細胞實驗往往需要較大量的蛋白質，而從牛骨切片中提取的蛋白質用于96孔板，北歐生物科技公司開發了能夠*適用于6，12，24，48孔板的骨皮質切片。
將人破骨細胞分散覆蓋于牛骨皮質片上，然后加入不同濃度的抗重吸收劑（A: 90 μM, B: 30 μM, C: 10 μM, D: 0 μM）。第6天取等量細胞培養上清液用于檢測膠原c端交聯肽（ctx）的量（培養基ELISA-CrossLaps）,從骨片上轉移破骨細胞并且用阻凝蛋白蘇木精染色，形成可見的凹點。
我們推薦在轉移至96孔板之前，先將骨切片置于含培養基的10%血清中清洗三次。
重吸收實驗一般持續72小時（見圖2）。然而在加入試劑到破骨細胞培養液中16或24小時后，就可觀察到細微的變化了，甚至8小時后即可用相應方法觀察到。
與凹點染色和劃線不同，培養基酶免吸附法Crosslaps不要求破骨細胞培養的終止。因此，可以從相同的股切片中獲得幾個樣品，從而使互換性檢測特定物質影響下的破骨細胞活性成為可能。材料的處置與常見細胞培養物的處置相同。
【參考文獻】
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