技術文章 / article
掌握PeproTech細胞因子溶解稀釋方法的重要性
2020-05-05 瀏覽次數：3452
一、查看說明書
二、溶解
1. 離心
細胞因子為凍干粉，開蓋*00-12000rpm離心30s。
2. 溶解
根據說明書紅色標識地方的描述，選擇合適的溶解液，溶解到后邊的濃度范圍內。如此可以確保蛋白充分溶解復性，保證產品質量。請不要使用非建議溶液溶解。
目的：使細胞因子從無活性的凍干粉狀態充分溶解復性成為有活性的蛋白溶液。
注意：不要用渦旋振蕩儀劇烈渦旋，可以用槍頭輕輕吹打幾次助溶。有的細胞因子溶解比較慢，需要在室溫靜置或者搖床低速搖一段時間使充分溶解。
3.短期儲存
溶解后的蛋白溶液可以在2-8度儲存1周。
4.長期儲存
如果您的實驗，一周內不能用完。必須將第2步中獲得的溶液用含載體蛋白的溶液進一步稀釋。(詳見：三、稀釋)
目的：對溶解的蛋白溶液進行稀釋凍存。加入載體蛋白可以封閉掉管壁上的蛋白結合位點，且可以在低溫下維持細胞因子的穩定。
三、稀 釋
1. 配制
配制0.1%BSA或者10%FBS或者5%海藻糖的稀釋液備用（確保無菌），這三種稀釋液的配制的Buffer可以用PBS或者細胞基礎培養基。使用以上三種稀釋液的任意一種稀釋重懸的蛋白溶液，稀釋濃度根據您的使用濃度確定，不要低于10ug/ml。即可分裝成小管，凍存在-20—-80度。
2.使用方法
使用時取用一支凍存的細胞因子，加入到您的培養基中至使用濃度。細胞因子應避免反復凍融。
四、FAQ
1：為什么會有這么多種溶解方法？
A：蛋白的溶解性與很多因素有關，其中比較重要的是pH值和離子強度。PeproTech的細胞因子或重組蛋白在出廠前均經嚴格測試，說明書上所標明的溶解液是能夠將該細胞因子或重組蛋白*溶解的液體。如果您所用的溶解液的pH值和離子強度與說明書中所標明的不符，很多時候會造成細胞因子或重組蛋白不能*溶解或者根本無法溶解，這樣所配得的細胞因子或重組蛋白必然活性不夠或喪失。
2：高于或低于該濃度范圍會有什么問題呢？
A：首先，細胞因子或蛋白會不穩定，即很容易出現活性下降的現象。其次，高于這個濃度范圍，可能會超過該蛋白的大溶解濃度，即蛋白無法*溶解。再者，高于或低于該濃度范圍，蛋白可能會出現聚集(aggregation)，終結果還是部分蛋白未溶解，導致蛋白活性的減弱。
3：若想保證溶解液與凍干粉充分混勻，以實現細胞因子或重組蛋白的*溶解，該怎么辦呢？
A：多數細胞因子或重組蛋白的凍干粉是非常容易溶解的，一般我們用移液槍的槍頭輕吹幾下，即可使細胞因子或重組蛋白*溶解。對于不易溶解的細胞因子或蛋白，PeproTech會在說明書中進行備注(Note)
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